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盐酸安罗替尼（Anlotinib dihydrochloride）实验方法步骤SOP

Anlotinib (AL3818) dihydrochloride ，安罗替尼（CAS#1360460-82-7 目录号D808726 请使用生理盐水而非PBS进行稀释，因为PBS可能导致沉淀。）

说明：本SOP基于安罗替尼产品信息（CAS：1360460-82-7）及相关文献制定，适用于体外细胞实验与体内动物实验，仅限科研使用，严禁用于人体及动物治疗。

一、基础信息（快速查阅）

二、细胞实验操作流程

1. 试剂配制（核心注意事项）

1. 储备液配制：用DMSO配制成10 mM储备液，涡旋充分溶解，瞬时离心，分装（10–50 μL/管），-20℃避光保存。

2. 工作液配制：用生理盐水稀释储备液，再用完全培养基调至所需浓度，现配现用，全程禁止使用PBS。

3. 对照组设置：溶剂对照组DMSO终浓度与药物组一致，≤0.1%。

2. 配液浓度换算表

3. 细胞培养与给药

1. 细胞选择：高表达VEGFR/PDGFR/FGFR的肿瘤细胞（A549、NCI-H226、SK-OV-3、SW-620、7721等）。

2. 常规培养：含10% FBS的DMEM/RPMI-1640，37℃、5% CO₂。

3. 接种：96孔板3000–8000个/孔，贴壁12–24 h。

4. 给药：设置0.01、0.1、1、5、10 μM浓度梯度，每组3复孔，孵育48–72 h。

4. 检测方法与记录

三、动物实验操作流程

1. 动物与模型准备

动物：SPF级裸鼠、C57BL/6小鼠、SD大鼠；体重18–22 g，雌雄各半。

模型：人源肿瘤皮下异种移植瘤（肺癌、卵巢癌、结肠癌、肾癌、胶质瘤等）。

伦理：遵循IACUC规范，适应环境3–5 d，肿瘤体积达100–200 mm³开始给药。

2. 给药方案

1. 配制：用生理盐水溶解，禁止添加PBS，现配现用。

2. 剂量：1.5–6 mg/kg，口服灌胃（i.g.），每日1次。

3. 周期：连续21–28 d，观察肿瘤生长与动物状态。

3. 给药日历模板

4. 观测指标与终点

1. 日常监测：每日记录体重、精神、饮食，体重下降＞10%需暂停给药。

2. 肿瘤测量：每2–3 d测长径a、短径b，体积V = a×b²/2。

3. 终点取材：脱颈处死，剥离肿瘤，称重、拍照，做Western blot、IHC（Ki-67、CD31、p-VEGFR2）。

4. 关键结果：有效剂量显著抑制肿瘤生长，抑瘤率＞60%，动物耐受良好。

四、安全与合规提醒

1. 仅限体外细胞与动物科研，严禁临床/人体/动物治疗使用。

2. 全程禁止用PBS稀释，必须用生理盐水，防止沉淀。

3. DMSO操作在通风橱进行，佩戴防护用具，避免接触与吸入。

4. 药物储存严格-20℃避光，储备液避免反复冻融。

5. 动物灌胃控制体积与速度，防止误吸；废弃物按危化品处理。

五、应急与技术支持

产品咨询/技术支持：全国免费电话400-168-1698；邮箱info@DKM.cn

（注：* 上述方法来自公开文献，仅供相同目的实验参考。如实验目的、材料、方法不同，请参考其他文献。）

• 验证及参考文献
  
  
• [1] Xie C, et al. Cancer Sci. 2018, 109(4):1207-1219.
• [2] Sun Y, et al. J Hematol Oncol. 2016, 9(1):105.
• [3] Zhong CC, et al. Acta Pharmacol Sin. 2018, 39(6):1048-1063.