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RMC-7977 实验方法步骤SOP
说明：本SOP基于RMC-7977产品特性（CAS：2765082-12-8）及相关文献制定，适用于体外细胞实验与体内动物实验，仅供科研使用，严禁用于人体及动物治疗。
一、基础信息（快速查阅）
项目 | 详情 |
CAS号 | 2765082-12-8 |
化学式/分子量 | C₄₇H₆₀N₈O₆S / 865.09 |
纯度 | >98.5% |
溶解度 | DMSO 125 mg/mL（144.49 mM） |
靶点 | RAS、MAPK/ERK通路、GPCR/G蛋白 |
储存条件 | 粉末-20℃可稳定3年；储备液-20℃避光保存，避免反复冻融 |
二、细胞实验操作流程（含配液模板）
1. 试剂配制（核心步骤）
•储备液配制：取RMC-7977粉末，用DMSO配制成10 mM储备液，涡旋充分溶解，瞬时离心后分装（每管10–50 μL），-20℃避光保存。
•工作液配制：用完全培养基稀释储备液至所需浓度（推荐梯度：0.01、0.1、1、5、10 μM），现配现用，避免长时间放置。
2. 配液浓度换算表（直接填写使用）
目标浓度 | 1 mg RMC-7977 所需DMSO体积 | 5 mg RMC-7977 所需DMSO体积 | 10 mg RMC-7977 所需DMSO体积 | 备注（实际用量） |
1 mM | 1.16 mL | 5.78 mL | 11.56 mL | |
5 mM | 0.23 mL | 1.16 mL | 2.31 mL | |
10 mM | 0.12 mL | 0.58 mL | 1.16 mL | |
50 mM | 0.02 mL | 0.12 mL | 0.23 mL |
3. 细胞培养与给药
1.细胞选择：选用RAS突变/依赖细胞系（如KRAS G12C、G12D、G12V、NRAS/HRAS突变株）。
2.常规培养：使用含10% FBS的DMEM/RPMI-1640培养基，37℃、5% CO₂培养箱中培养。
3.细胞接种：96孔板每孔接种3000–8000个细胞，置于培养箱中贴壁12–24 h（确保细胞贴壁率≥80%）。
4.给药处理：吸弃旧培养基，加入配制好的梯度浓度药物工作液，设置DMSO对照组（与药物组DMSO终浓度一致），每组3复孔，轻轻摇匀后放回培养箱。
5.孵育：持续孵育72 h后进行检测。
4. 检测方法与结果记录
检测指标 | 检测方法 | 操作要点 | 结果记录（填写） |
细胞增殖/活力 | CCK-8或MTT法 | 检测波长450 nm，计算细胞活力 | |
细胞凋亡 | Annexin V-FITC/PI双染流式 | 避光操作，流式细胞仪检测凋亡率 | |
通路抑制 | Western blot | 检测p-ERK、p-MEK、RAS-GTP水平 | |
克隆形成 | 结晶紫染色 | 给药后培养10–14 d，染色后计数克隆数 |
三、动物实验操作流程（含给药日历）
1. 动物与模型准备
•动物品系：免疫缺陷裸鼠或C57BL/6小鼠；KPC胰腺癌基因工程小鼠（推荐用于胰腺癌相关实验）。
•模型构建：皮下异种移植瘤（接种RAS突变肿瘤细胞）或胰腺癌原位模型，建模后观察肿瘤生长，待肿瘤体积达到100–200 mm³时开始给药。
•伦理要求：遵循IACUC规范，饲养于SPF级环境，自由饮食饮水，适应环境3–5 d后开始实验。
2. 给药方案
•药物配制：用含5% DMSO+40% PEG300+5% Tween-80的生理盐水混悬RMC-7977，涡旋充分混匀，现配现用。
•给药剂量：10–30 mg/kg（根据实验需求调整），腹腔注射（i.p.），每日1次。
•给药周期：短期（10 d，观察癌前病变消退）；长期（28 d，评估肿瘤延缓与生存期）。
3. 给药日历模板（可填写）
实验天数 | 给药剂量（mg/kg） | 给药途径 | 小鼠体重（g） | 肿瘤体积（mm³） | 备注（状态/异常情况） |
Day 1 | i.p. | ||||
Day 2 | i.p. | ||||
Day 3 | i.p. | ||||
Day 4–10 | i.p. | ||||
Day 11–28 | i.p. |
4. 观测指标与终点处理
1.日常观测：每日记录小鼠体重、精神状态、饮食饮水情况，评估药物耐受性（无明显体重下降视为耐受）。
2.肿瘤测量：每2–3 d测量肿瘤长径和短径，按公式V = 长×宽²/2计算肿瘤体积，记录数据。
3.实验终点：
￮短期实验（10 d）：处死后取材肿瘤/胰腺，用于Western blot、IHC检测（p-ERK、Ki-67、TUNEL）。
￮长期实验（28 d）：记录小鼠无进展生存期与总生存期，终点取材进行相关检测。
5. 文献验证关键结果（参考）
•KPC胰腺癌模型：治疗后癌前病变显著减少，RAS下游信号（p-ERK）显著抑制。
•异种移植瘤模型：肿瘤生长抑制率>60%，部分肿瘤实现消退。
•耐受性：给药期间小鼠无明显体重下降及脏器毒性。
四、安全与合规提醒（必看）
1.本试剂仅限体外细胞与动物科研使用，严禁用于临床治疗、人体实验及动物治疗。
2.操作DMSO及药物时，佩戴手套、口罩、护目镜，在通风橱内进行，避免皮肤接触与吸入。
3.药物储存严格遵循-20℃避光条件，储备液避免反复冻融，配制好的工作液及时使用。
4.动物给药严格控制浓度与注射体积，避免溶剂毒性；实验废弃物按实验室危险化学品规范处理。
5.实验过程中严格记录数据，确保实验可重复。
五、应急与联系方式
产品咨询/技术支持：全国免费电话400-168-1698；邮箱info@DKM.cn
