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小鼠CD4+CD25+ 调节性T 细胞（Treg）分选试剂盒
专门用于从小鼠脾脏单细胞悬液中高效分选 CD4+CD25+ Treg 细胞。
本试剂盒采用两步分选策略：第一步（富集）：通过免疫磁珠去除非目标细胞，实现 CD4+ T细胞的预富集；第二步（阳性选择）：利用CD25 抗体特异性标记目标细胞，并由可解离磁珠进行捕获，随后通过 ReleaseBuffer将磁珠从细胞表面温和解离。最终获得无磁珠标记的小鼠CD4+CD25+Treg 细胞，可直接应用于下游的分子生物学与细胞生物学实验。
产品特点：
高纯度：分选获得的Treg 细胞纯度可达 90%。
高活率：分选过程温和，获得的细胞活率大于95%。
无柱分选：无需分离柱，仅使用磁力架即可完成目的细胞分离。
多细胞群体获取：通过初步富集可获得CD4+T 细胞；进一步分选后，不仅可获得CD4+CD25+Treg细胞，还可同时收集 CD4+CD25-T 细胞，便于开展后续对照实验或功能研究。
评测数据：
1.富集后CD4+ T细胞纯度检测
使用小鼠Treg 细胞分选试剂盒中CD4EnrichmentBeads 组分对小鼠脾脏 CD4+ T 细胞先进行富集。富集前后的细胞用FITC 标记的 anti-mouse CD4 抗体（克隆号 GK1.5）染色后进行流式细胞分析。结果显示，CD4+ T细胞脾脏初始占比为15.87%，富集后CD4+ T细胞纯度可达90.20%（90.58±1.89%）（图1）。
图1. 流式检测富集前后CD4+ T 细胞纯度
2.分选后CD4+CD25+ Treg 细胞和CD4+CD25-T 纯度检测
使用小鼠Treg 细胞分选试剂盒从富集后的CD4+ T 细胞分选Treg 细胞。分选前后的细胞用FITC 标记的 anti-mouse CD4 抗体（克隆号 GK1.5）和 PE标记的 anti-mouseCD25抗体（克隆
号 3C7）进行染色。结果显示，脾细胞中CD4+CD25+ Treg 细胞占比为1.73%（图2 左），分选后Treg 细胞纯度达93.04%（图2中）；同时可获得CD4+CD25-T 细胞，其纯度为90.08%（图2 右）。
图2. 流式检测分选前后CD4+CD25+ Treg 细胞纯度
3.Foxp3 表达验证
为进一步验证分选细胞的Treg 特性，采用固定/破膜后进行胞内染色，检测关键转录因子FOXP3的表达。分选前后的细胞用FITC 标记的 anti-mouse CD4 抗体（克隆号 GK1.5）PE标记
的 anti-mouse CD25 抗体（克隆号 3C7）和AlexaFluor647 标记的anti-mouseFoxp3（克隆
号 150D）染色。流式结果显示，分选后CD4+细胞占比95.24%，其中CD25+FOXP3+双阳性细胞占CD4+细胞的86.12%, 证明本试剂盒可获得具有典型Treg 表型（CD4+CD25+Foxp3+ ）的目标细胞（图3）。
图3. 分选前后CD4+CD25+Foxp3+ Treg 细胞流式染色分析
4.分选前后细胞活率分析
用小鼠Treg 细胞分选试剂盒从脾脏分选目的细胞，分选前后细胞经 7-AAD 染色后，使用流式细胞仪检测细胞活率。分选前活细胞比例为95.90%，分选后CD4+CD25+ Treg 细胞的活细胞比例为
96.49%，CD4+CD25-T 细胞的活细胞比例为96.85%，均保持高活率（图4）。
图4. 流式检测分选前后细胞活率5.分选后Treg 细胞功能分析
为评估分选所得Treg 细胞的生物学功能，将分选获得的CD4+CD25+ Treg 细胞与CD4+CD25-T 细胞进行共培养，检测其对效应T 细胞增殖的抑制能力。将CD4+CD25-细胞进行CFSE染色后，使用小鼠CD3/CD28 激活磁珠进行刺激，培养3 天。72h 后通过流式细胞术检测发现，77.55%的细胞发生增殖。而在加入CD4+CD25+ Treg 细胞（1:2）共培养条件下，增殖比例明显下降至49.55%（图5）。结果表明，本试剂盒分选获得的Treg 细胞具有免疫抑制功能，可有效抑制效应T 细胞增殖。
图5. 分选后Treg 细胞抑制功能检测
